Правильное хранение и восстановление исследовательских пептидов является основополагающим фактором для получения воспроизводимых и надежных экспериментальных результатов. Биологическая активность пептидов чувствительна к условиям хранения - неправильное хранение или восстановление может привести к частичной или полной потере активности, внося вариабельность, которая подрывает экспериментальные выводы. В этом руководстве описаны основные методы работы с пептидами и белками, доступными в компании Wellchain, включая особые требования к различным классам соединений.
Лиофилизация и долгосрочная стабильность
Все исследовательские пептиды Wellchain поставляются в виде лиофилизированных (сублимированных) порошков. При лиофилизации вода удаляется из пептидного препарата под вакуумом при низкой температуре, оставляя после себя сухую, стабильную пептидную лепешку или порошок. Этот процесс значительно повышает стабильность по сравнению с водными растворами за счет исключения реакций гидролиза и окисления, которые разрушают пептиды в растворе. Общий принцип хранения лиофилизированных пептидов заключается в следующем: -20°C для стандартных пептидов, -80°C для рекомбинантных белков. Стандартные пептиды, включая БПЦ-157, TB-500, GHK-Cuи пептиды долголетия, такие как Эпиталон и SS-31 стабильны в течение 24+ месяцев при температуре -20°C. Рекомбинантные белки, такие как HGH 10 МЕ и IGF-1 LR3 Для обеспечения максимальной долгосрочной стабильности рекомендуется хранить при температуре -80°C.
Лучшие практики восстановления
На этапе восстановления исследователи могут непреднамеренно вызвать деградацию. Ключевые принципы:
- Выбор растворителя: Большинство пептидов легко растворяются в стерильной бактериостатической воде или физиологическом солевом растворе. Исключения: IGF-1 LR3 следует восстанавливать в 0,1% уксусной кислоте с 0,1% BSA для предотвращения адсорбции на пластиковых поверхностях; GHK-Cu Восстанавливается в стерильной воде (PBS также подходит, но избегайте буферов, содержащих ЭДТА, которые лишают ион меди); 5-Амино-1MQ и SLU-PP-332 Перед водным разбавлением необходимо подготовить запас ДМСО.
- Температура: Доведите лиофилизированные флаконы до комнатной температуры перед добавлением растворителя, чтобы предотвратить тепловой шок и конденсационное загрязнение порошка.
- Бережное смешивание: Никогда не перемешивайте растворы пептидов - это приводит к появлению пузырьков воздуха и сил сдвига, которые могут нарушить структуру пептидов, особенно для крупных белков, таких как HGH. Осторожно перемешайте или используйте медленное вращение из стороны в сторону.
- Объем: Добавляйте растворитель небольшими порциями вдоль стенок флакона; избегайте направления потока непосредственно на лиофилизированный кек.
Аликвотирование для предотвращения деградации при замораживании и оттаивании
Наиболее эффективным методом сохранения активности пептидов в ходе исследований является аликвотирование сразу после восстановления. Каждый цикл замораживания-оттаивания создает риск деградации за счет образования кристаллов льда, повреждающих структуру пептида, изменения концентрации при частичном оттаивании и увеличения воздействия кислорода на поверхность. Лучшая практика: сразу после восстановления разделите раствор на одноразовые аликвоты в объеме, необходимом для эксперимента. Например, при восстановлении БПЦ-157 10 мг до 1 мг/мл и используя 0,5 мг на эксперимент, приготовьте 20 аликвот по 0,5 мл для хранения при -20°C или при 2-8°C, если использование неминуемо. Для приготовления аликвот небольшого объема используйте микроцентрифужные пробирки с низким уровнем связывания, так как адсорбция белка на стандартных пластиковых поверхностях может быть значительной для разбавленных растворов.
Специальные соображения по классам соединений
NAD+ (500 мг): В отличие от пептидов, НАД+ гигроскопичен и быстро разрушается под воздействием влаги. Храните сухой порошок в обезвоженном виде при -20°C и готовьте свежие водные растворы для каждого эксперимента, если это возможно. Растворы NAD+ быстрее разрушаются при кислом pH и повышенной температуре - готовьте свежие и используйте сразу же.
Пептиды меди (GHK-Cu): Координационный комплекс меди(II) в GHK-Cu делает его чувствительным к свету. Храните восстановленные растворы в янтарных флаконах и избегайте длительного воздействия ультрафиолета. Буферы, содержащие ЭДТА, хелатируют медь и кардинально меняют свойства соединения - используйте только безмедные буферные системы.
Рекомбинантные белки (HGH, IGF-1 LR3): Они значительно более чувствительны, чем синтетические пептиды. Никогда не замораживайте восстановленные HGH - В результате белок необратимо денатурируется. IGF-1 LR3 требует низкосвязывающих емкостей и белка-носителя BSA для предотвращения потерь при адсорбции на поверхности, особенно при низких концентрациях, используемых в клеточных анализах.
Все описанные соединения предназначены только для лабораторных исследований. Не предназначены для использования человеком или ветеринаром.
